实验步骤：
1. 蛋白质抽提
实验对象为组织样品，取适量（约150mg）新鲜组织样品或正确保存的组织样品，加0.3-0.4ml含蛋白酶抑制剂的总蛋白抽提试剂（或核蛋白抽提试剂），匀浆后冰上裂解，离心抽提总蛋白（或核蛋白）。
实验对象为细胞样品，每份样品取 1×106～1×107细胞，PBS清洗细胞以去除血清等培养添加物，去PBS加0.1-0.2ml含蛋白酶抑制剂的总蛋白抽提试剂（或核蛋白抽提试剂）,冰上裂解，离心抽提总蛋白（或核蛋白）。
2. 蛋白质定量
按BCA蛋白质定量试剂盒操作说明操作，测定样品浓度。
3. 变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)
将准备好的样品液和预染蛋白marker分别上样，标准加进第一个孔中，80v电泳浓缩胶，100v电泳分离胶。
4. 蛋白质转移到NC膜
按Bio-Rad蛋白转移装置说明组装滤纸凝胶纤维素膜夹层（黑胶白膜三明治模型），100v恒压条件下转膜，选定转膜时间（1KD/1min）。
5. Western blot膜的封闭和抗体孵育
膜在5％脱脂奶粉溶液中室温孵育1小时以封闭膜上的非特异结合。
封闭过的膜加入一抗（包括GAPDH或Actin内参抗体）室温孵育1.5小时，抗原抗体结合。0.15%PBST洗涤三次，每次15min。荧光二抗室温避光孵育1小时。
0.15%PBST洗涤三次，每次15min。
6. Western blot结果检测
荧光检测，利用LI-COR ODYSSEY 蛋白成像仪检测蛋白条带荧光强度。
7. Western blot数据分析
目的蛋白的灰度值除以内参GAPDH/Actin的灰度值以校正误差，所得结果代表某样品的目的蛋白相对含量。
8. 提供实验报告
包括详细的实验方法及免疫印迹实验结果的相关数据。
WESTERN BLOT是以电泳分离组分，将其从凝胶转移到一种固相支持体，继之以针对特定氨基酸序列的特异性抗体作为探针检测目的蛋白的一种分子生物学技术。
免疫印迹(immunoblot)又称蛋白质印迹(Western blot)，它是根据抗原抗体的特异性结合检测复杂样品中的某种蛋白的方法。该法是在凝胶电泳和固相免疫测定技术基础上发展起来的一种新的免疫生化技术。由于免疫印迹具有SDS-PAGE的高分辨力和固相免疫测定的高特异性和敏感性，现已成为蛋白分析的一种常规技术。免疫印迹常用于鉴定某种蛋白，并能对蛋白进行定性和半定量分析。
免疫印迹(immunoblot)又称蛋白质印迹(Western blot)，它是根据抗原抗体的特异性结合检测复杂样品中的某种蛋白的方法。该法是在凝胶电泳和固相免疫测定技术基础上发展起来的一种新的免疫生化技术。由于免疫印迹具有SDS-PAGE的高分辨力和固相免疫测定的高特异性和敏感性，现已成为蛋白分析的一种常规技术。免疫印迹常用于鉴定某种蛋白，并能对蛋白进行定性和半定量分析。
